熒光顯微鏡(Fluorescence microscope) 是免疫熒光細胞化學的基本工具。它是由光源、濾板系統和光學系統等主要部件組成,利用一定波長的光源照射被檢物體,使之發出熒光, 然后在顯微鏡下觀察物體的形狀及其所在位置。熒光顯微鏡用于研究細胞內物質的吸收、運輸、化學物質的分布及定位等。 細胞中有些物質,如葉綠素等,受紫外線照射后可發熒光另有一些物質本身雖不能發熒光,但如果用熒光染料或熒光抗體染色后,經紫外線照射亦可發熒光,熒光顯微鏡就是對這類物質進行定性和定量研究的工具之一。
1、細胞/細菌/污泥類樣本
①細胞: 凍存的細胞;25平方厘米培養瓶長到70%加滿培養基室溫固定好寄送;
②細菌:菌液5000 rpm離心10 min,于1.5 mL離心管中得到綠豆大小沉淀,寄送沉淀。細菌類需要死活染色/ROS染色的,一般加冰袋泡沫盒4度保存,樣品不和冰袋接觸。
③蛋白/多糖類:樣本加冰袋泡沫盒4度保存或者2.5%的戊二醛固定4度保存,樣品不和冰袋接觸。
④污泥類:樣本如果太厚,可以進行冷凍切片,具體請和工作人員溝通。
2、植物類樣本
① 直接拍攝:樣品長寬不超過20mm,高不超過10mm;或直徑不超過10mm,厚度不超過5mm,一定標出測試面。一般加冰袋泡沫盒4度保存,樣品不和冰袋接觸。
②制樣后拍攝:可進行簡單冰切及刀切,軟化等。樣本準備好后加冰袋泡沫盒4度保存,樣品不和冰袋接觸。
3、生物膜類樣本
①金屬/瓷磚/巖石等塊體類:建議長寬高尺寸不超過1 cm,且均要求樣品表面平整,需要標出拍攝面(測試面起伏<200um);
②薄膜類:直徑尺寸不超過2 cm,一般加冰袋泡沫盒4度保存,樣品不和冰袋接觸;
③若在爬片上培養生物膜,可將爬片粘于培養皿底部,充滿培養基,封口膜密封完全,再4度保存。
4、提供清楚激發/發射波長,拍攝倍數等要求信息;若需要染色,需要注明染色劑種類,標明染料名稱和拍攝條件(激發/發射波長)
備注:若做細胞攝取實驗或其他亞細胞器的定位實驗時,要求樣品自帶熒光。
5、細胞類樣品直接拍攝,需要封片后常溫避光郵寄。
6、固體類直接拍攝樣品建議長寬不超過20mm,厚度不超過10mm,重量不超過10g,一定標出測試面。
服務周期:
一般為樣品接收后的1-2周,具體實驗周期及送樣時間請與e測試工作人員溝通確認,謝謝!
交付內容:
每樣交付5張照片。結果反饋請在測試完成一周內,不建議回收樣品,如有需要請提前反饋給e測試工作人員。
1、激光共聚焦拍照和普通熒光顯微鏡拍照有什么不同?
熒光顯微鏡使用的光源比激光共聚焦通能低,以短波長的紫外光為主,激光共聚焦光源主要是激光,分辨率高,可以逐點掃描,可以做三維重構,適合多重染色的樣品觀察。
2、熒光顯微鏡的工作原理?
熒光顯微鏡主要是通過激發光照射發光物質,然后觀察發光物質吸收激發光能量后其內部原子從高能級躍遷到低能級時發射出的熒光。因此激發光的能量和發射光的能量是絕對重要的,直接影響觀察結果。在熒光顯微鏡中主要是通過兩組濾光片來實現對激發光能量和發射熒光能量的控制。常用的濾光片為:紫外激發光濾光片(300-450nm)、藍色光激發光濾光片(470-495nm)、綠光激發光濾光片(538-560nm),紅外激發光濾光片(608-648nm)。